Mycobacterium tuberculosis Immunogenes Protein MPT64 (mpt64)

Der Mycobacterium tuberculosis -Komplex (MTBC) ist ein bekanntes Mittel für infektiöse Lungentuberkulose (TB). Andererseits können auch andere Mykobakterien als Tuberkulose (MOTT) eine ähnliche Krankheit verursachen. Die Anzeichen und Symptome einer Lungeninfektion aufgrund von MTBC oder MOTT ähneln sich oft, und ihre Unterscheidung durch säurefeste Färbung ist unverständlich. Die Identifizierung und Speziation des Mykobakteriums wird für die angemessene Behandlung und Behandlung der betroffenen Personen unerlässlich.

Das Revised National Tuberculosis Control Program (RNTCP) empfiehlt die Verwendung von Flüssigkulturen für die Schnelldiagnose und Arzneimittelsensitivitätstests (DST) für alle Intermediate Reference Laboratories (IRLs) und National Reference Laboratories (NRLs), da dies die Bearbeitungszeit für die Kultur erheblich verkürzt und Arzneimittelempfindlichkeitstests.

Schnelle bestätigende Identifizierung von M. tuberculosisist wichtig, da die herkömmlichen biochemischen Methoden arbeitsaufwändig und zeitaufwändig sind und aufwendige Sicherheitsvorkehrungen erfordern. Während dieses langen und langwierigen Prozesses kann ein infizierter Patient die Krankheit auf viele andere Personen übertragen. Auf Nukleinsäureamplifikation basierende Verfahren sind schnell und spezifisch, erfordern jedoch eine Person, die technisch versiert ist, und erfordern auch eine teure Ausrüstung. Daher ist ein einfacher, schneller und empfindlicher Unterscheidungstest zur schnellen Identifizierung des M. tuberculosis – Komplexes erforderlich genaue Diagnose und Behandlung der Krankheit.

  • MPT64 ist eines der wichtigsten Kulturfiltratproteine ​​(24 kDa), das von den Genen der RD2-Region kodiert wird und es hat sich gezeigt, dass es ein spezifisches Antigen ist, das den M. tuberculosis – Komplex von anderen Mykobakterien als Tuberkulose unterscheidet ( MOTT)-Spezies.
  • Ein MPT64-basierter, einfacher und schneller immunochromatographischer Assay wurde von Standard Diagnostics, Inc. (SD) (Yongin, Korea) entwickelt, der als SD Bioline TB Ag MPT64 RAPID -Test (SD Bioline-Kit). Es wurde berichtet, dass dieser Lateral-Flow-Test den M. tuberculosis -Komplex aus dem MOTT unter Verwendung des monoklonalen Maus-Anti-MPT64-Antikörpers identifiziert.
  • Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, um die Nützlichkeit des SD Bioline-Kits für die Identifizierung von Mykobakterien in flüssigen Medien zu überprüfen. Diese Ergebnisse wurden mit einem konventionellen biochemischen Test korreliert und die Sensitivität, Spezifität und Vorhersagewerte dieses Kits wurden ebenfalls bewertet.

MATERIALEN UND METHODEN

Studienfächer

Die Abteilung für Mikrobiologie des National Institute of TB and Respiratory Diseases ist ein nationales Referenzlabor (NRL) unter dem RNTCP, Indien. Die Abstrich-positiven diagnostischen Proben werden direkt dem Line-Sonden-Assay zur schnellen Diagnose von multiresistenter Tuberkulose (MDR-TB) unterzogen, während die Abstrich-negativen und kritischen Monats-Follow-up-Proben von MDR-Patienten (dritter, vierter, fünfter, sechster , achtzehnter, einundzwanzigster und vierundzwanzigster Monat) werden in ein Flüssigkultursystem MGIT 960 (Mycobacteria Growth Indicator Tube, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ; USA) gegeben. Die Studie wurde über einen Zeitraum von vier Monaten (Dezember 2012–März 2013) direkt an 105 Stichproben durchgeführt, die vom MGIT 960-Instrument als positiv gekennzeichnet wurden.

Dekontamination von Proben und Kulturverfahren

Die Sputumproben wurden in einem BSL III-Labor unter Verwendung der Standardmethode N-Acetyl-L-cystein (NALC)/Natriumhydroxid (NaOH) verarbeitet. Die verarbeitete Probe (0,5 ml) wurde inokuliert und im MGIT 960-System bis inkubiert die Röhrchen wurden von der Maschine als positiv markiert oder bis sie negativ waren (42 Tage). Ziehl Neelsen (ZN)-Abstriche wurden an den positiven Kulturen durchgeführt, um das Vorhandensein von säurefesten Bazillen und Schlangensträngen zu bestimmen. Die Sterilität von MGIT-positiven Kulturen wurde auf Blutagarplatten durchgeführt. 100 Mikroliter Kultur wurden zur biochemischen Identifizierung doppelt in die Lowenstein Jensen (LJ)-Schrägkulturen geimpft.

SD-Bioline-Tuberkulose-Assay

Der SD-Bioline-Assay wurde an säurefesten Bazillen durchgeführt – positive MGIT-Kulturen, wie vom Hersteller beschrieben. Flüssigkultur (0,1 ml) wurde auf die Probenvertiefung gegeben. Die Testkassettenstreifen wurden für 15–30 Minuten bei Raumtemperatur (RT) inkubiert. Die rosa Bande in der „C“-Region bestätigte die Gültigkeit des Tests. Eine zusätzliche rosa Bande in der „T“-Region wurde als positiv für das MPT64 Ag interpretiert. Nur die rosa Bande in der „C“-Region und keine Bande in der „T“-Region wurden als negativ für das MPT 64-Antigen angesehen. Keine Bande in der Region „C“ wurde als ungültiger Test interpretiert. H37Rv wurde als positive Kontrolle für jeden neuen Kit genommen.

Biochemische Identifizierung

Die LJ-Kulturen wurden auf Koloniemorphologie und Pigmentierung untersucht und unter Verwendung des Ziehl Neelsen (ZN)-Verfahrens gefärbt. Sie wurden einer konventionellen biochemischen Identifizierung unter Verwendung von Niacin, Nitrat und dem hitzebeständigen Katalase-Test (HRCT) unterzogen. Der Techniker, der den Test durchführte, wurde gegenüber den SD Bioline-Ergebnissen verblindet.

ERGEBNISSE

Insgesamt 105 säurefeste Bazillen-positive Flüssigkulturen wurden für die vorliegende Studie ausgewählt. Die Kontrollbande war in allen getesteten Kulturen zu sehen, wodurch der Test validiert wurde. Die H37-Rv-Kontrolle zeigte das Erscheinen einer rosa Bande in der Testregion (T-Band), was das Vorhandensein des MPT 64-Antigens bestätigte. Siebenundsiebzig Isolate wurden als M. tuberculosis identifiziert und 27 wurden sowohl durch biochemische Identifizierung als auch durch den SD Bioline-Assay als MOTT identifiziert.

Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Monkey Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT63 (mpt63)

1-CSB-RP149074Ba(A3) Cusabio
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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-10ug

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-1mg

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-100ug

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-200ug

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-500ug

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT64 Protein (aa 24-228) [His]

VAng-Yyj0104-10g Creative Biolabs 10 µg 1015.2 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt64 Protein (aa 1-232) [His]

VAng-Lsx06142-100g Creative Biolabs 100 µg 717.6 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt64 Protein (aa 1-232) [His]

VAng-Lsx06142-1mg Creative Biolabs 1 mg 3686.4 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-1mg

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-200ug

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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-500ug

QP8820-ec-500ug EnQuireBio 500ug 1816.8 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-50ug

QP8820-ec-50ug EnQuireBio 50ug 522 EUR

Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

20-abx110611 Abbexa
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Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

20-abx110664 Abbexa
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Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

20-abx300132 Abbexa
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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT51 Protein (aa 27-299)

VAng-Yyj0102-50gEcoli Creative Biolabs 50 µg (E. coli) 2292 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT63 Protein (aa 30-159)

VAng-Yyj0103-10g Creative Biolabs 10 µg 424.8 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis mpt53 Protein (aa 39-173)

VAng-Yyj0526-50gEcoli Creative Biolabs 50 µg (E. coli) 1815.6 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis mpt83 Protein (aa 25-220)

VAng-Yyj0527-50gEcoli Creative Biolabs 50 µg (E. coli) 2011.2 EUR

Mycobacterium tuberculosis MPT51/MPB51 antigen (mpt51)

1-CSB-EP363615MVZ Cusabio
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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis mpt53 Protein (aa 1-177) [His]

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis mpt53 Protein (aa 1-177) [His]

VAng-Lsx06140-1mg Creative Biolabs 1 mg 3686.4 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt70 Protein (aa 1-197) [His]

VAng-Lsx06143-100g Creative Biolabs 100 µg 717.6 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt70 Protein (aa 1-197) [His]

VAng-Lsx06143-1mg Creative Biolabs 1 mg 3686.4 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT83 Protein (aa 1-224) [His]

VAng-Lsx06144-100g Creative Biolabs 100 µg 717.6 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT83 Protein (aa 1-224) [His]

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt63/MPB63 Protein (aa 1-163) [His]

VAng-Lsx06141-100g Creative Biolabs 100 µg 717.6 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt63/MPB63 Protein (aa 1-163) [His]

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Immunogenic protein MPT64 Antibody (HRP)

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Immunogenic protein MPT64 Antibody (HRP)

20-abx109243 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (FITC)

20-abx107754 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (FITC)

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Immunogenic protein MPT64 Antibody (Biotin)

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Immunogenic protein MPT64 Antibody (Biotin)

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M. Tuberculosis Mpt64 Antigen

DAGA-184 Creative Diagnostics 100 µg 868.8 EUR

Immunogenic Protein MPT63 (mpt63) Antibody

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Immunogenic Protein MPT63 (mpt63) Antibody

20-abx300245 Abbexa
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  • 2214.00 EUR
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Mycobacterium Tuberculosis MoeX Protein

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CFP10 protein (Mycobacterium tuberculosis)

30R-3240 Fitzgerald 50 ug 584.4 EUR

Immunogenic protein MPT63 Antibody (HRP)

20-abx109229 Abbexa
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  • 718.80 EUR
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Immunogenic protein MPT63 Antibody (FITC)

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Immunogenic protein MPT63 Antibody (Biotin)

20-abx106399 Abbexa
  • 493.20 EUR
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Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) Antibody

abx415707-1ml Abbexa 1 ml 727.2 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis HSP Protein

VAng-Yyj0063-10g Creative Biolabs 10 µg 2250 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis mpa Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis tkt Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis clpB Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MbtB Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MoeX Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MoeX Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis PPE2 Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis ureC Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis CFP10 Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis CFP10 Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis plsB1 Protein

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Recombinant Mycobacterium Tuberculosis ppe11 Protein

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Diskrepante Ergebnisse wurden bei zwei Isolaten gefunden. Eine Kultur, positiv für den SD-Bioline-Test, wurde vom konventionellen biochemischen Test als MOTT gemeldet (falsch positiv), während eine andere vom SD-Bioline-Test negativ war und M. tuberculosis durch biochemische Identifizierung anzeigte (falsch-negativ). Der SD-Bioline-Test wurde für beide Isolate wiederholt. Eine positive Bande wurde in einem der Isolate beobachtet, die zuvor durch den SD-Bioline-Test als negativ gemeldet wurden, während die Ergebnisse für das zweite Isolat die gleichen waren. Die Sensitivität, Spezifität, positiv prädiktiven und negativ prädiktiven Werte des SD AgMPT64-Kits betrugen 100, 96,4, 98,72 bzw. 100 %

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