Mycobacterium tuberculosis Immunogenes Protein MPT64 (mpt64)

Der Mycobacterium tuberculosis -Komplex (MTBC) ist ein bekanntes Mittel für infektiöse Lungentuberkulose (TB). Andererseits können auch andere Mykobakterien als Tuberkulose (MOTT) eine ähnliche Krankheit verursachen. Die Anzeichen und Symptome einer Lungeninfektion aufgrund von MTBC oder MOTT ähneln sich oft, und ihre Unterscheidung durch säurefeste Färbung ist unverständlich. Die Identifizierung und Speziation des Mykobakteriums wird für die angemessene Behandlung und Behandlung der betroffenen Personen unerlässlich.

Das Revised National Tuberculosis Control Program (RNTCP) empfiehlt die Verwendung von Flüssigkulturen für die Schnelldiagnose und Arzneimittelsensitivitätstests (DST) für alle Intermediate Reference Laboratories (IRLs) und National Reference Laboratories (NRLs), da dies die Bearbeitungszeit für die Kultur erheblich verkürzt und Arzneimittelempfindlichkeitstests.

Schnelle bestätigende Identifizierung von M. tuberculosisist wichtig, da die herkömmlichen biochemischen Methoden arbeitsaufwändig und zeitaufwändig sind und aufwendige Sicherheitsvorkehrungen erfordern. Während dieses langen und langwierigen Prozesses kann ein infizierter Patient die Krankheit auf viele andere Personen übertragen. Auf Nukleinsäureamplifikation basierende Verfahren sind schnell und spezifisch, erfordern jedoch eine Person, die technisch versiert ist, und erfordern auch eine teure Ausrüstung. Daher ist ein einfacher, schneller und empfindlicher Unterscheidungstest zur schnellen Identifizierung des M. tuberculosis – Komplexes erforderlich genaue Diagnose und Behandlung der Krankheit.

  • MPT64 ist eines der wichtigsten Kulturfiltratproteine ​​(24 kDa), das von den Genen der RD2-Region kodiert wird und es hat sich gezeigt, dass es ein spezifisches Antigen ist, das den M. tuberculosis – Komplex von anderen Mykobakterien als Tuberkulose unterscheidet ( MOTT)-Spezies.
  • Ein MPT64-basierter, einfacher und schneller immunochromatographischer Assay wurde von Standard Diagnostics, Inc. (SD) (Yongin, Korea) entwickelt, der als SD Bioline TB Ag MPT64 RAPID -Test (SD Bioline-Kit). Es wurde berichtet, dass dieser Lateral-Flow-Test den M. tuberculosis -Komplex aus dem MOTT unter Verwendung des monoklonalen Maus-Anti-MPT64-Antikörpers identifiziert.
  • Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, um die Nützlichkeit des SD Bioline-Kits für die Identifizierung von Mykobakterien in flüssigen Medien zu überprüfen. Diese Ergebnisse wurden mit einem konventionellen biochemischen Test korreliert und die Sensitivität, Spezifität und Vorhersagewerte dieses Kits wurden ebenfalls bewertet.

MATERIALEN UND METHODEN

Studienfächer

Die Abteilung für Mikrobiologie des National Institute of TB and Respiratory Diseases ist ein nationales Referenzlabor (NRL) unter dem RNTCP, Indien. Die Abstrich-positiven diagnostischen Proben werden direkt dem Line-Sonden-Assay zur schnellen Diagnose von multiresistenter Tuberkulose (MDR-TB) unterzogen, während die Abstrich-negativen und kritischen Monats-Follow-up-Proben von MDR-Patienten (dritter, vierter, fünfter, sechster , achtzehnter, einundzwanzigster und vierundzwanzigster Monat) werden in ein Flüssigkultursystem MGIT 960 (Mycobacteria Growth Indicator Tube, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ; USA) gegeben. Die Studie wurde über einen Zeitraum von vier Monaten (Dezember 2012–März 2013) direkt an 105 Stichproben durchgeführt, die vom MGIT 960-Instrument als positiv gekennzeichnet wurden.

Dekontamination von Proben und Kulturverfahren

Die Sputumproben wurden in einem BSL III-Labor unter Verwendung der Standardmethode N-Acetyl-L-cystein (NALC)/Natriumhydroxid (NaOH) verarbeitet. Die verarbeitete Probe (0,5 ml) wurde inokuliert und im MGIT 960-System bis inkubiert die Röhrchen wurden von der Maschine als positiv markiert oder bis sie negativ waren (42 Tage). Ziehl Neelsen (ZN)-Abstriche wurden an den positiven Kulturen durchgeführt, um das Vorhandensein von säurefesten Bazillen und Schlangensträngen zu bestimmen. Die Sterilität von MGIT-positiven Kulturen wurde auf Blutagarplatten durchgeführt. 100 Mikroliter Kultur wurden zur biochemischen Identifizierung doppelt in die Lowenstein Jensen (LJ)-Schrägkulturen geimpft.

SD-Bioline-Tuberkulose-Assay

Der SD-Bioline-Assay wurde an säurefesten Bazillen durchgeführt – positive MGIT-Kulturen, wie vom Hersteller beschrieben. Flüssigkultur (0,1 ml) wurde auf die Probenvertiefung gegeben. Die Testkassettenstreifen wurden für 15–30 Minuten bei Raumtemperatur (RT) inkubiert. Die rosa Bande in der „C“-Region bestätigte die Gültigkeit des Tests. Eine zusätzliche rosa Bande in der „T“-Region wurde als positiv für das MPT64 Ag interpretiert. Nur die rosa Bande in der „C“-Region und keine Bande in der „T“-Region wurden als negativ für das MPT 64-Antigen angesehen. Keine Bande in der Region „C“ wurde als ungültiger Test interpretiert. H37Rv wurde als positive Kontrolle für jeden neuen Kit genommen.

Biochemische Identifizierung

Die LJ-Kulturen wurden auf Koloniemorphologie und Pigmentierung untersucht und unter Verwendung des Ziehl Neelsen (ZN)-Verfahrens gefärbt. Sie wurden einer konventionellen biochemischen Identifizierung unter Verwendung von Niacin, Nitrat und dem hitzebeständigen Katalase-Test (HRCT) unterzogen. Der Techniker, der den Test durchführte, wurde gegenüber den SD Bioline-Ergebnissen verblindet.

ERGEBNISSE

Insgesamt 105 säurefeste Bazillen-positive Flüssigkulturen wurden für die vorliegende Studie ausgewählt. Die Kontrollbande war in allen getesteten Kulturen zu sehen, wodurch der Test validiert wurde. Die H37-Rv-Kontrolle zeigte das Erscheinen einer rosa Bande in der Testregion (T-Band), was das Vorhandensein des MPT 64-Antigens bestätigte. Siebenundsiebzig Isolate wurden als M. tuberculosis identifiziert und 27 wurden sowohl durch biochemische Identifizierung als auch durch den SD Bioline-Assay als MOTT identifiziert.

Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 (mpt64)

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Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

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Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

20-abx110664 Abbexa
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Immunogenic Protein MPT64 (mpt64) Antibody

20-abx300132 Abbexa
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Rat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Rat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Rat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Monkey Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Monkey Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Monkey Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

E09M0361-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Dog Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Mouse Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Mouse Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Human Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Human Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Human Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

E01M0361-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Goat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Goat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Goat Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Rabbit Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Rabbit Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Rabbit Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

E04M0361-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Guinea pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Guinea pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

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Guinea pig Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT64 ELISA kit

E05M0361-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Immunogenic protein MPT64 Antibody (Biotin)

20-abx106341 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (Biotin)

20-abx106400 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (FITC)

20-abx107754 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (FITC)

20-abx107812 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (HRP)

20-abx109171 Abbexa
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Immunogenic protein MPT64 Antibody (HRP)

20-abx109243 Abbexa
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Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-100ug

QP9654-ye-100ug EnQuireBio 100ug 788 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-10ug

QP9654-ye-10ug EnQuireBio 10ug 362 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-1mg

QP9654-ye-1mg EnQuireBio 1mg 2747 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-200ug

QP9654-ye-200ug EnQuireBio 200ug 1260 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-500ug

QP9654-ye-500ug EnQuireBio 500ug 1804 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT64 Protein, His, Yeast-50ug

QP9654-ye-50ug EnQuireBio 50ug 480 EUR

M. Tuberculosis Mpt64 Antigen

DAGA-184 Creative Diagnostics 100 µg 724 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis MPT64 Protein (aa 24-228) [His]

VAng-Yyj0104-10g Creative Biolabs 10 µg 846 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt64 Protein (aa 1-232) [His]

VAng-Lsx06142-100g Creative Biolabs 100 µg 598 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis Mpt64 Protein (aa 1-232) [His]

VAng-Lsx06142-1mg Creative Biolabs 1 mg 3072 EUR

mpt64 Antibody

1-CSB-PA358713YA01MVZ Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody

1-CSB-PA14947A0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody

1-CSB-PA14949A0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

MPT64 antibody

70R-15092 Fitzgerald 100 ug 327 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody

A55719 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody

A57629 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Antibody (HRP)

20-abx300001 Abbexa
  • 411.00 EUR
  • 1845.00 EUR
  • 599.00 EUR
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  • 100 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 20 ug
  • 50 ug

mpt64 Antibody (FITC)

20-abx300002 Abbexa
  • 411.00 EUR
  • 1845.00 EUR
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  • 100 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 20 ug
  • 50 ug

mpt64 Antibody (Biotin)

20-abx300003 Abbexa
  • 411.00 EUR
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MPT64 antibody (HRP)

60R-1115 Fitzgerald 100 ug 327 EUR

MPT64 antibody (FITC)

60R-1116 Fitzgerald 100 ug 349 EUR

MPT64 antibody (biotin)

60R-1117 Fitzgerald 100 ug 327 EUR

Mycobacterium tuberculosis Immunogenic protein MPT63 (mpt63)

1-CSB-RP149074Ba(A3) Cusabio
  • 611.00 EUR
  • 309.00 EUR
  • 1827.00 EUR
  • 939.00 EUR
  • 1218.00 EUR
  • 397.00 EUR
  • 100ug
  • 10ug
  • 1MG
  • 200ug
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  • 50ug

mpt64 Antibody, HRP conjugated

1-CSB-PA358713YB01MVZ Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, FITC conjugated

1-CSB-PA358713YC01MVZ Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, Biotin conjugated

1-CSB-PA358713YD01MVZ Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, HRP conjugated

1-CSB-PA14947B0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
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mpt64 Antibody, FITC conjugated

1-CSB-PA14947C0Rb Cusabio
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  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, Biotin conjugated

1-CSB-PA14947D0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
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  • 50ug

mpt64 Antibody, HRP conjugated

1-CSB-PA14949B0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, FITC conjugated

1-CSB-PA14949C0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Antibody, Biotin conjugated

1-CSB-PA14949D0Rb Cusabio
  • 317.00 EUR
  • 335.00 EUR
  • 100ug
  • 50ug

mpt64 Polyclonal Antibody, HRP Conjugated

A55720 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody, FITC Conjugated

A55721 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody, Biotin Conjugated

A55722 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody, HRP Conjugated

A57630 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody, FITC Conjugated

A57631 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

mpt64 Polyclonal Antibody, Biotin Conjugated

A57632 EpiGentek 100 µg 570.55 EUR

Mycobacterium Tuberculosis MoeX Protein

20-abx260302 Abbexa
  • 885.00 EUR
  • 342.00 EUR
  • 1609.00 EUR
  • 0.5 mg
  • 100 ug
  • 1 mg

CFP10 protein (Mycobacterium tuberculosis)

30R-3240 Fitzgerald 50 ug 487 EUR

Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) Antibody

abx415707-1ml Abbexa 1 ml 606 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022066-1mg Abbexa 1 mg 1017 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022067-1mg Abbexa 1 mg 1080 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022073-1mg Abbexa 1 mg 1080 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022087-1mg Abbexa 1 mg 829 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

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Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022089-1mg Abbexa 1 mg 787 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx022090-1mg Abbexa 1 mg 787 EUR

Mycobacterium tuberculosis Antibody

abx023092-1ml Abbexa 1 ml 599 EUR

Mycobacterium tuberculosis antibody

20-MR50 Fitzgerald 1 mg 116 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-100ug

QP8820-ec-100ug EnQuireBio 100ug 707 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-10ug

QP8820-ec-10ug EnQuireBio 10ug 326 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-1mg

QP8820-ec-1mg EnQuireBio 1mg 2303 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-200ug

QP8820-ec-200ug EnQuireBio 200ug 1115 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-500ug

QP8820-ec-500ug EnQuireBio 500ug 1514 EUR

Recombinant M. tuberculosis Immunogenic protein MPT63 Protein, His, E.coli-50ug

QP8820-ec-50ug EnQuireBio 50ug 435 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis CFP10 Protein

VAng-Yyj0026-100g Creative Biolabs 100 µg 1091 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis CFP10 Protein

VAng-Yyj0026-1mg Creative Biolabs 1 mg 2577 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis CFP10 Protein

VAng-Yyj0026-500g Creative Biolabs 500 µg 1834 EUR

Recombinant Mycobacterium Tuberculosis clpB Protein

VAng-Yyj0029-inquire Creative Biolabs inquire Ask for price

Diskrepante Ergebnisse wurden bei zwei Isolaten gefunden. Eine Kultur, positiv für den SD-Bioline-Test, wurde vom konventionellen biochemischen Test als MOTT gemeldet (falsch positiv), während eine andere vom SD-Bioline-Test negativ war und M. tuberculosis durch biochemische Identifizierung anzeigte (falsch-negativ). Der SD-Bioline-Test wurde für beide Isolate wiederholt. Eine positive Bande wurde in einem der Isolate beobachtet, die zuvor durch den SD-Bioline-Test als negativ gemeldet wurden, während die Ergebnisse für das zweite Isolat die gleichen waren. Die Sensitivität, Spezifität, positiv prädiktiven und negativ prädiktiven Werte des SD AgMPT64-Kits betrugen 100, 96,4, 98,72 bzw. 100 %

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