Ziege-anti-Ratte IgG (Fc) beschichtete Polystyrolpartikel
Immer mehr Hinweise deuten darauf hin, dass große antigenhaltige Partikel starke T-Zell-abhängige hochaffine Antikörperreaktionen induzieren. Diese Antworten erfordern eine Internalisierung großer Partikel nach der Erkennung durch den B-Zell-Rezeptor (BCR) auf B-Zellen. Die molekularen Mechanismen, die die BCR-vermittelte Internalisierung steuern, bleiben jedoch unklar. Hier verwenden wir einen quantitativen Bildanalyseansatz mit hohem Durchsatz, um zwischen B-Zell-Partikelbindung und Internalisierung zu unterscheiden. Wir zeigen systematisch unter Verwendung von niedermolekularen Inhibitoren, dass menschliche B-Zellen eine SYK-abhängige IgM-BCR-Signaltransduktion über PI3K benötigen, um große Anti-IgM-beschichtete Partikel effizient zu internalisieren.
An der IgM-BCR-vermittelten Aktivierung von PI3K sind sowohl das Adapterprotein NCK als auch der Korezeptor CD19 beteiligt. Interessant, wir zeigen hier eine starke NCK-Abhängigkeit ohne tiefgreifende Anforderung des Co-Rezeptors CD19 in B-Zell-Antworten auf große Partikel. Darüber hinaus zeigen wir, dass das IgM-BCR/NCK-Signalereignis die RAC1-Aktivierung erleichtert, um den Aktin-Zytoskelett-Umbau zu fördern, der für die Partikelaufnahme erforderlich ist. Daher etablieren wir NCK/PI3K/RAC1 als attraktive IgM-BCR-Signalachse für biologische Eingriffe, um unerwünschte Antikörperreaktionen auf große Partikel zu verhindern.
Einführung
Der erste Schritt bei der Induktion der Antikörperproduktion ist die Bindung von externem Antigen an den B-Zell-Rezeptor (BCR) auf naiven B-Zellen. Die BCR-Ligation durch Antigen führt zu einer BCR-vermittelten Transmembransignalisierung und Antigeninternalisierung, gefolgt von proteolytischem Abbau und Präsentation von Antigen-abgeleiteten Peptiden durch Haupthistokompatibilitätskomplex-Klasse-II-Moleküle (MHCII) auf der B-Zell-Plasmamembran . MHCII/Antigen-Komplexe werden von Antigen-spezifischen T-Zell-Rezeptoren erkannt, die von CD4 + -T-Zellen exprimiert werden . Nach Bildung einer stabilen Antigen-spezifischen Interaktion erhalten B-Zellen Hilfe von CD4 +T-Zellen über co-stimulierende Moleküle und lösliche Zytokine zur Förderung der B-Zell-Differenzierung in hochaffine Antikörper-produzierende Plasmazellen während Keimzentrums-(GC)-Reaktionen in sekundären lymphatischen Organen.
- Der BCR besteht aus einem membrangebundenen Immunglobulin, das mit einem CD79a- und CD79b-Heterodimer assoziiert ist, das intrazelluläre Immunrezeptor-Tyrosin-Aktivierungsmotive (ITAMs) enthält .
- Bei der Erkennung verwandter Antigene wird die Phosphorylierung der ITAMs durch die Kinase LYN der SRC-Familie und die Milz-Tyrosin-Kinase (SYK) initiiert.
- Diese phosphorylierten Motive rekrutieren mehrere Adapter- und Effektorproteine, aus denen das Signalosom besteht, das SYK, B-Zell-Linker (BLNK), Brutons Tyrosinkinase (BTK), Phospholipase C-γ2 (PLCγ2) und den Co-Rezeptor CD19 enthält. Das Signalosom treibt die Aktivierung mehrerer nachgeschalteter Effektorwege an, um das Signal vom BCR zu verstärken, das zu Veränderungen im Zellstoffwechsel, der Genexpression und der Organisation des Zytoskeletts führt. Viele Proteine, die für die Transmembran-Signalübertragung benötigt werden, sind auch an der Antigen-Internalisierung und dem anschließenden intrazellulären Transport des Antigen-BCR-Komplexes beteiligt .
Die meisten Studien, die Signalkomponenten und molekulare Mechanismen beschreiben, die die BCR-vermittelte Internalisierung von Antigenen kontrollieren, verwenden kleine lösliche Antigene oder Antigene, die an ebene Lipiddoppelschichtoberflächen oder Plasmamembranschichten gebunden sind und durch kraftabhängige Extraktion oder enzymatische Freisetzung extrahiert werden .
B-Zellen sind jedoch auch in der Lage, große Partikel zu internalisieren. Diese Fähigkeit wurde lange Zeit vernachlässigt, aber in den letzten Jahren haben mehrere Gruppen, einschließlich unserer eigenen, die Existenz dieses zellbiologischen Prozesses zur Internalisierung großer Partikel, einschließlich anti-IgM-beschichteter Bakterien und Kügelchen, nachgewiesen . Die physiologische Bedeutung dieses Weges wurde kürzlich demonstriert, indem gezeigt wurde, dass die Internalisierung großer Partikel durch follikuläre B-Zellen zu einer starken GC-Antwort und der Erzeugung von klassengewechselten Antikörpern mit hoher Affinität in Mäusen führte . Von zusätzlicher Bedeutung bei der Aufnahme großer Partikel ist der Prozess der Epitopausbreitung. Die Epitopausbreitung ist ein Prozess, bei dem Antigene, die sich von dem Antigen unterscheiden, das von den antigenspezifischen BCR erkannt wurde, auf der Plasmamembran der B-Zellen präsentiert werden . Als solche B-Zellen und CD4 +T-Zellen mit unterschiedlicher Spezifität können interagieren, um die laufende Immunantwort anzutreiben. Dieses Verfahren ist sehr wünschenswert, wenn es während der Infektion auf fremde Antigene abzielt, um die B-Zell-Antwort zu erweitern. Im Gegensatz dazu ist in Fällen von Selbstreaktivität bei Autoimmunreaktionen oder Alloimmunisierung gegen transfundierte Blutprodukte die Ausbreitung von Epitopen ein klinisches Problem, das dringend einer gezielten Therapie bedarf.
Goat anti-Rat IgG (Fc) Coated Polystyrene Particles |
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RTPFC-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Goat anti-Rat IgG (H&L) Coated Polystyrene Particles |
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RTPXA-60-5 | Spherotech | 5 mL | 283 EUR |
Ms IgG Coated Polystyrene Particles |
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MsGPX-50-5 | Spherotech | 5 mL | 314 EUR |
Anti-DNP Coated Polystyrene Particles |
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DNPP-50-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
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DIGP-05-2 | Spherotech | 2 mL | 279 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
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DIGP-20-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
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DIGP-40-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Gt anti-Rb IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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RPFc-08-20 | Spherotech | 20 mL | 269 EUR |
Gt anti-Rb IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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RPFc-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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MPFc-08-100 | Spherotech | 100 mL | 923 EUR |
Gt anti-Ms IgG(Fc) Polystyrene Particles |
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MPFc-08-20 | Spherotech | 20 mL | 269 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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MPFc-150-4 | Spherotech | 4 mL | 411 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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MPFc-30-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Polystyrene Particles |
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MPFc-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Ms anti-Hu IgG(Fc) Polystyrene Particles |
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HUAMP-100-4 | Spherotech | 4 mL | 299 EUR |
Rabbit IgG (Fc) Coated Fluorescent Particles |
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RGFcP5--10056-3 | Spherotech | 3 mL | 3172 EUR |
Streptavidin Coated Polystyrene Particles |
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SVP-05-100 | Spherotech | 100 mL | 1836 EUR |
Streptavidin Coated Polystyrene Particles |
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SVP-2000-4 | Spherotech | 4 mL | 466 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
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BP-08-10 | Spherotech | 10 mL | 243 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
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BP-30-5 | Spherotech | 5 mL | 269 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
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BP-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
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BP2-150-5 | Spherotech | 5 mL | 507 EUR |
Gt anti-Hu IgG (Fc) Coated Blue Particles |
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HPBFC-30-5 | Spherotech | 5 mL | 344 EUR |
Gt anti-Hu IgG (Fc) Coated Blue PMMA Particles |
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HPMAFc-30-5 | Spherotech | 5 mL | 350 EUR |
Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles |
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MPAF-05-2 | Spherotech | 2 mL | 310 EUR |
Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles |
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MPAF-20-2 | Spherotech | 2 mL | 294 EUR |
Goat IgG (Fc) fragment, purified |
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20011-1-FC | Alpha Diagnostics | 0.5 mg | 250 EUR |
DiagPoly Goat Anti-mouse IgG (Fc) Conjugated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
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DNM-C019 | Creative Diagnostics | 20 mL | 833 EUR |
DiagPoly Goat Anti-mouse IgG (Fc) Conjugated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
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DNM-C024 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Goat Anti-mouse IgG (Fc) Conjugated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm |
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DNM-C025 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
Dk anti-Sh IgG Polystyrene Particles |
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SPXA-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Goat IgG (fc)-Biotin conjugate (isotype control) |
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20011-Fc-B | Alpha Diagnostics | 100 ug | 164 EUR |
Goat IgG (fc)-FITC conjugate (isotype control) |
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20011-Fc-F | Alpha Diagnostics | 100 ug | 164 EUR |
Goat IgG (fc)-HRP conjugate (isotype control) |
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20011-Fc-HP | Alpha Diagnostics | 100 ug | 164 EUR |
Ms IgG Coated Magnetic Particles |
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MSGMS-30-5 | Spherotech | 5 mL | 259 EUR |
Ms IgG Coated Magnetic Particles |
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MSGMS-50-5 | Spherotech | 5 mL | 259 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 1 µm |
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DNM-M011 | Creative Diagnostics | 1 mL | 636 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
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DNM-C001 | Creative Diagnostics | 10 mL | 1010 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 1.0-1.4 µm |
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DNM-C002 | Creative Diagnostics | 10 mL | 1010 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
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DNM-C003 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm |
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DNM-C004 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.3-0.4 µm |
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DNM-C005 | Creative Diagnostics | 10 mL | 676 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.4-0.6 µm |
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DNM-C006 | Creative Diagnostics | 10 mL | 823 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
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DNM-C007 | Creative Diagnostics | 10 mL | 663 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 1.5-1.9 µm |
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DNM-C008 | Creative Diagnostics | 5 mL | 823 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
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DNM-C009 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 4.0-4.9 µm |
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DNM-C010 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 5.0-5.9 µm |
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DNM-C011 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm |
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DNM-C012 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 8.0-12.9 µm |
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DNM-C013 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1000 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 13.0-17.9 µm |
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DNM-C014 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1079 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 18.0-24.0 µm |
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DNM-C015 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1092 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
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DNM-C016 | Creative Diagnostics | 10 mL | 885 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
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DNM-C017 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.6 µm |
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DNM-C018 | Creative Diagnostics | 5 mL | 1000 EUR |
Gt anti-Ms IgG (H&L) Polystyrene Particles |
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MP-08-20 | Spherotech | 20 mL | 269 EUR |
Gt anti-Ms IgG (H&L) Polystyrene Particles |
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MP-60-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Donkey anti-Gt IgG (H&L) Polystyrene Particles |
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GPXA-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Gt anti-Hu IgG (H&L) Polystyrene Particles |
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HUP-08-5 | Spherotech | 5 mL | 198 EUR |
Gt anti-Hu IgG(H&L) Polystyrene Particles |
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HUP-100-5 | Spherotech | 5 mL | 304 EUR |
Gt anti-Hu IgG(H&L) Polystyrene Particles |
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HUP-150-5 | Spherotech | 5 mL | 334 EUR |
Gt anti-Hu IgG (H&L) Polystyrene Particles |
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HUP-30-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Gt anti-Hu IgG(H&L) Polystyrene Particles |
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HUP-60-5 | Spherotech | 5 mL | 320 EUR |
Goat Anti-Human IgG FC |
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C020220-1mg | Unibiotest | 1mg | 269 EUR |
Goat Anti-Human IgG FC |
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C020220-50mg | Unibiotest | 50mg | 6015 EUR |
Goat Anti-Mouse IgG (Fc) |
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GAMG80Fc-0100 | Equitech | 100ml | 404.3 EUR |
Goat Anti-Mouse IgG (Fc) |
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GAMG80Fc-0500 | Equitech | 500ml | 707.2 EUR |
Goat Anti-Human IgG (Fc) |
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GAHG80Fc-0100 | Equitech | 100ml | 404.3 EUR |
Goat Anti-Human IgG (Fc) |
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GAHG80Fc-0500 | Equitech | 500ml | 707.2 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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40-IG15 | Fitzgerald | 100 ml | 352 EUR |
Goat anti Rabbit IgG Fc |
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41C-CB1136 | Fitzgerald | 2 mg | 249 EUR |
Rabbit anti Goat IgG Fc |
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41R-1013 | Fitzgerald | 1 mg | 188 EUR |
Rabbit anti Goat IgG Fc |
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41R-1014 | Fitzgerald | 1 mg | 207 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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41R-1125 | Fitzgerald | 1 mg | 188 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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70-B9039GA00-A0 | Fitzgerald | 5 mg | 138 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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70-S1206GA00-A7 | Fitzgerald | 5 mg | 192 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-B9019R000-R0 | Fitzgerald | 10 ml | 133 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-B9039G000-S2 | Fitzgerald | 10 ml | 73 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1203GND0-D0 | Fitzgerald | 5 mg | 192 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1203GND1-D0 | Fitzgerald | 10 ml | 192 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1211G000-G4 | Fitzgerald | 10 ml | 133 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1211G000-S4 | Fitzgerald | 10 ml | 133 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1211G001-S4 | Fitzgerald | 10 ml | 133 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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20-S1703GND1-D0 | Fitzgerald | 10 ml | 203 EUR |
Goat anti Human IgG Fc |
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70R-IG003 | Fitzgerald | 1 mg | 291 EUR |
Goat anti Pig IgG Fc |
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70R-IG007 | Fitzgerald | 1 mg | 369 EUR |
Goat anti Rabbit IgG Fc |
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70R-IG011 | Fitzgerald | 1.5 mg | 378 EUR |
Goat anti Rabbit IgG Fc |
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70R-IG017 | Fitzgerald | 2 mg | 381 EUR |
Rat IgG (Fc) fragment, purified (isotype control) |
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20005-1-FC | Alpha Diagnostics | 0.5 mg | 250 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) FerroMagnetic Particles |
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FMFc-25-5 | Spherotech | 5 mL | 320 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) FerroMagnetic Particles |
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FMFc-40-5 | Spherotech | 5 mL | 320 EUR |
Gt anti-Rb IgG (Fc) Magnetic Particles |
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RMFc-40-10 | Spherotech | 10 mL | 304 EUR |
Gt anti-Rb IgG (Fc) Magnetic Particles |
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RMSFc-30-10 | Spherotech | 10 mL | 320 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Fluorescent Particles |
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MFcP-3052-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Fluorescent Particles |
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MFcP-3056-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Fluorescent Particles |
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MFcP-3058-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Fluorescent Particles |
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MFcP-3068-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Fluorescent Particles |
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MFcP-3069-5 | Spherotech | 5 mL | 263 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Magnetic Particles |
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MMFc-40-10 | Spherotech | 10 mL | 304 EUR |
Gt anti-Ms IgG (Fc) Magnetic Particles |
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MMSFc-30-10 | Spherotech | 10 mL | 320 EUR |
Hier untersuchten wir die molekularen Mechanismen, die die Internalisierung und Antigenpräsentation großer Partikel in menschlichen B-Zellen vermitteln. Ein quantitativer Hochdurchsatz-Bildanalyseansatz wurde unter Verwendung von inaktiviertem Anti-IgM-beschichtetem Salmonella typhimurium als Modellpartikel verwendet, um die IgM-BCR-vermittelte Internalisierung zu quantifizieren. Wir zeigen, dass die Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Haupttreiber der Aktin-abhängigen Aufnahme großer Partikel durch menschliche B-Zellen ist. An der IgM-BCR-vermittelten Aktivierung von PI3K sind sowohl das Adapterprotein NCK als auch der Korezeptor CD19 beteiligt . Wir zeigen, dass die IgM-BCR/NCK-Achse für die Internalisierung großer Partikel in menschlichen B-Zellen erforderlich ist. Diese Achse treibt die Internalisierung über die Aktivierung des Aktin-Zytoskelett-Modulators RAC1 an. Insgesamt zeigen unsere Daten, dass die NCK-PI3K-RAC1-Achse wesentlich ist, um eine humorale Immunantwort auf große Partikel aufzubauen.